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2024年12月，南京医科大学李晶等团队在Journal of Extracellular Vesicles（IF=15.5）上发表了“Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography”的研究论文。该论文提供了一种切向流过滤（TFF）结合尺寸排阻色谱（SEC）的方法来大规模分离和纯化源自人脐带间充质干细胞（HucMSCs）的sEVs亚群。S1-sEVs和S2-sEVs在大小、膜标记蛋白和携带物方面表现出稳定的变化，通过体外实验和动物疾病模型，研究人员验证了S1-sEVs和S2-sEVs的不同功能。S1-sEVs表现出更强的免疫调节作用，而S2-sEVs则在促进细胞增殖和血管生成方面表现出更强的能力。这种方法为针对不同MSCs适应症的靶向治疗干预提供了可能。拜谱生物体为该研究提供了蛋白酶组学拜谱生物。
用英文怎么说主题词：Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography
提出学术期刊：Journal of Extracellular Vesicles
影晌细胞：15.5
提出耗时：2024.12.7
作家单位名称：南京医科大学
组学技术应用：miRNA测序、淀粉酶组学（拜谱海洋生物出示）
探析产品：外泌体
分析路线图：
一、探究可是
01、能够 将TFF与SEC软件系统结合在一起来区分sEVs亚群和HucMSCs
为了能构建时候临床护理应用的MSC-sEVs的大大范围生孩子，小说编辑所采用了了种将TFF与SEC相紧密结合的的方式，从HucMSCs的情况培育基中分头离和纯化sEVs。按照核高蛋白印刷痕迹、NTA数据分析、纳流细胞膜术的效果表述拆分的两只峰也许意味着了sEVs的两只有差异亚群。小说编辑将相应的于这两只峰峰值的sEVs亚群各自重新命名为S1-sEVs和S2-sEVs（图1）。
图1：TFF紧密联系SEC机系统从HucMSCs中分发型离和定量分析sEVs亚群
02、MSC-sEVs亚群的定量分析
sEVs标志物的差异表达意味着它们可能具有不同的内容或功能。为了表征MSC-sEVs亚群的异质性，首先使用球蛋白组学分析。总共在S1和S2-sEVs亚群中分别鉴定出1326和1246个蛋白质，其中447个蛋白质在S1-sEVs中高度表达，127个蛋白质在S2-sEVs中富集（图2a）。KEGG分析表明，蛋白酶体途径是S1-sEVs富集蛋白中最富集的通路，而代谢途径在S2-sEVs中显示出最高水平的富集（图2b）。除此之外，还发现S1-sEVs中生长因子受体的富集，例如表皮生长因子受体（EGFR）、肝细胞生长因子受体（HGFR）、成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）等。然而，在S2-sEVs中，枢纽蛋白与代谢、糖酵解和缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路密切相关（图2c-h）。这说明了S1-sEVs和S2-sEVs在靶细胞活动的调节中可能具有不同的作用。
图2：的两个sEVs亚群的蛋清质组学研究
为了探索sEVs亚群中的其他分子，作者进行了miRNA测序，并在S1-sEVs和S2-sEVs中分别鉴定了173和79个miRNA两个sEVs亚群之间的差异表达miRNA，其中在S1-sEVs中发现了113个独特的miRNA，而在S2-sEVs中仅发现了19个miRNA（图3a-b）。通过qRT-PCR验证了在S1-sEVs或S2-sEVs中富集的代表性miRNA，包括let-7b-5p、miR-155-5p、let-7c-5p、miR-9-5p和miR-30d-5p（图3c-g）。在S1-sEVs中，核心节点靶基因包括酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白zeta（YWHAZ）、BTB结构域和CNC同源物1（BACH1）、丛蛋白D1（PLXND1）、高迁移率组AT-hook1（HMGA1）、SMAD家族成员2（SMAD2）、IL6、IL6R 和转化生长因子β受体1（TGFBR1).在S2-sEVs中，核心节点靶基因被鉴定为PR/SET结构域1（PRDM1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（CDKN1A）、原纤维蛋白2（FBN2）、Notch受体1（NOTCH1）、KLF转录因子6（KLF6）和贝克蛋白1（BECN1）。GO分析显示S1-sEVs组靶基因中与细胞内蛋白质转运、染色质或组蛋白修饰相关的丰富生物过程，而S2-sEVs组靶基因中富含细胞增殖或代谢相关生物过程的负调控（图3h-j）。KEGG通路分析，发现S1-sEVs的miRNAs靶基因在与RNA转运或贴壁连接等相关的信号通路中更富集，而S2-sEVs中的miRNAs靶基因在丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和Wingless/Integrated（WNT）信号通路中更富集（图3k）。
图3：两种sEVs亚群的miRNA谱
03、S1-sEVs和S2-sEVs对血细胞膜增值和巨噬血细胞膜极化的不同控制
依托于好几个sEVs亚群的区别攜帶物构成的，研发进步分用三种方法区别用量的S1-sEVs或S2-sEVs激发3T3癌神经元还有用脂多糖（LPS）整理小鼠骨髓起源的巨噬癌神经元（BMDMs）。结局知道S1-sEVs和S2-sEVs对癌神经元生长期和裂变强度具体表现出区别的决定，但会对巨噬癌神经元极化的功能存在着对比分析（图4a-p）。
图4：S1-sEVs和S2-sEVs对上皮内部增值能力和巨噬上皮内部极化的对比宏观调控
04、S1-sEVs和S2-sEVs前边肢血管痉挛中的不同之处自动调节
MSC非常诞生的sEVs进行推进新血栓的组成后面肢坏死医治中被大范围有关资料，以便观察分析S1-sEVs和S2-sEVs对血栓转换成和坏死组织开展粉碎的影晌，进行右侧股动脉血栓结扎建立联系了小鼠后肢坏死3d模型。后果表面与S1-sEVs较之，S2-sEVs行为出领航的促血栓转换成性能特点，引起坏死引导破损后后肢迅猛可以维修和粉碎（图5a-o）。
图5：S1-sEVs和S2-sEVs对后肢缺血性的有差异疗法的效果
05、S1-sEVs和S2-sEVs在皮肤图片患处康复中的功能
MSC还有诞生的sEV因为其在操作、周围神经损伤、烧伤或高血糖发病引发的的面部白色皮肤特效创伤处长好中的的作用而被比较广泛论述。为了能让了解分离法的sEVs亚群对面部白色皮肤特效创伤处长好的导致，本论述搭建一个存在深部2度烧伤的大鼠模板。导致表面S2-sEVs确认对糖酵解的主动性导致对面部白色皮肤特效创伤处长好突出表现出非常的有利的导致（图6a-p）。
图6：S1-sEVs和S2-sEVs对皮肤图片创口痊愈的各种反应
06、S1-sEVs和S2-sEVs对DSS引发的乙状结肠炎的各种诊治实际效果
原作者看见S1-sEVs和S2-sEVs对巨噬细胞核正负极的对比分析调接在此之后，马上在小鼠直肠炎型号中估评鸟卵的免疫抗体调接职能。成果论述了S1-sEVs诊疗DSS帮助的直肠炎的特异形（图7a-s）。
图7：S1-sEVs和S2-sEVs对造成 创伤康复的不一样的关系
07、sEVs2个亚群中生物工程进行的差别的调整
ESCRT信任性渠道和非ESCRT性渠道都指导性sEV的怪物造成。在某项探析中，创作者感觉了sEVs符号物在S1-sEVs和S2-sEVs中的差异性体现。EGFR是原素内吞渠道中已建设的HGS底物，或许在S1-sEVs和S2-sEVs泉河不错考察到EGF血清，但在S1-sEVs中EGFR泛素化级别要高得多，HGS在将泛素化运输优化到S1-sEVs中起重要的效果，顺利使用搭建HGS敲除内部系感觉HGS的短缺诱骗S1-sEVs的怪物造成明显缩短，但对S2-sEVs的行成基本上未损害，是因为S1-sEVs和S2-sEVs顺利使用不一样的的调试工作机制的分泌，对应叫作ESCRT信任性和ESCRT非信任性渠道（图8a-t）。
图8：sEVs的几个亚群内生物技术发生的的不同之处控制
二、优秀文章总结ppt
本研究使用TFF和SEC从人MSC中分离的两个sEV亚群在大小、膜标志物或携带物上表现出差异，并探究不同的sEVs亚群代表了MSCs的不同生物学功能。利用淀粉酶组学，miRNA测序及基因敲除，模型构建等分子生物学实验表明了高度表达CD9、HRS和GPC1的S1-sEVs表现出更大的免疫调节作用，而富含CD63和FLOT1/2表达的S2-sEVs在促进细胞增殖和血管生成方面具有增强的能力。这些差异归因于它们包含的特定蛋白质和miRNA。进一步研究显示，两个不同的sEVs亚群对应于不同的生物过程：ESCRT通路（S1-sEVs）和以脂质筏（S2-sEVs）为代表的ESCRT非依赖性通路（图9）。这种方法可能为各种MSC适应症的靶向治疗干预提供优势。
图9：sEVs亚群的微生物人工依赖性于不一样的的細胞内有效途径
三、拜谱总结
该研究使用TFF-SEC系统从人脐带间充质干细胞中规模化生产不同的sEVs亚群，并且鉴定和表征了两种不同的sEVs亚群，S1-sEVs和S2-sEVs，它们在生物发生、特征和携带物含量方面有所不同。这些差异导致了它们生物学功能的变化。虽然MSC衍生的SEV因其临床潜力而备受关注，但该研究引入了一个新概念，即利用这些不同的MSC sEVs亚群对特定疾病进行靶向治疗。拜谱生物为该研究提供了核蛋白组学检测分析服务，拜谱生物可提供完善成熟的转录组学、蛋白组学、代谢组学以及多组学联合产品技术服务体系，助力发表高分文献，欢迎致电咨询！
基准医学文献：
LiuW, Wang X, Chen Y, Yuan J, Zhang H, Jin X, Jiang Y, Cao J, Wang Z, Yang S, Wang B, Wu T, Li J. Distinct molecular properties and functions of small EV subpopulations isolated from human umbilical cord MSCs using tangential flow filtration combined with size exclusion chromatography. J Extracell Vesicles. 2025 Jan;14(1):e70029. doi: 10.1002/jev2.70029. PMID: 39783889; PMCID: PMC11714183
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